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关于冷冻细胞活化
点击次数:34 发布时间:2020-11-25
 

1.冷冻原则

足球竞猜软件冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。 


2.细胞活化后,约需数日,或继代一至二代。其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。

3.材料 :

①37 oC 恒温水槽 


足球竞猜软件②新鲜培养基 


足球竞猜软件③无菌吸管/ 离心管/ 培养瓶 


④液氮或干冰容器 


4.操作步骤: 


足球竞猜软件①操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。 


②自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。 


③将新鲜培养基置于37 °C 水槽中回温,回温后喷以70 % 酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。 


④取出冷冻管,立即放入37 °C 水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化,以70%ethanol 擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。 


足球竞猜软件⑤取出0.9 ml 解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为1:10~1:15),混合均匀,放入CO2 培养箱培养。另取0.1 ml 解冻细胞悬浮液作存活测试。 


足球竞猜软件⑥解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSO 或glycerol),依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10 ml 培养基之离心管内,离心1,000 rpm, 5 分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入CO2 培养箱培养。 


⑦若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。

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